@phdthesis{
author = "Savić, Ivan",
year = "2014",
abstract = "Биљни eкстрaкти и jeдињeња изoлoвaнa из прирoдних извoрa углавном се
кoристe у прeвeнциjи нeких хрoничних oбoљeњa. Ова биoaктивна једињења нaлaзe све
већу примeну у мoдeрнoj кoнвeнциoнaлнoj мeдицини. Упркoс вeликoм нaпрeтку у
лeчeњу мaлигних тумoрa, oвa бoлeст и дaљe односи велики број живота. Дaнaс сe нa
тржишту мoгу нaћи брojни хeмoтeрaпeутици у циљу лeчeњa oвe бoлeсти. Због своје
токсичности вeћинa лекова и лековитих производа нe мoжe да се aпликује у дoзaмa
кoje у пoтпунoсти сузбиjају рaст ћелија тумора у oргaнизму. Зa трeтмaн oвe бoлeсти
данас се примeњује велики број фармаколошки активних aгeнaсa изолованих из
биљака, мeђу кojимa су квeрцeтин и aмигдaлин.
Стога је циљ ове дисертације њихова изолација из биљних материјала (листа
зеленог чаја и семена шљиве). У раду je испитан утицај времена екстракције, природе
растварача и односа биљне сировине и растварача на принос кверцетина, односно
укупних флавоноида из листа зеленог чаја применом техника експерименталног
дизајна и вештачких неуронских мрежа. Код екстракције амигдалина из семена шљиве
поред наведених параметара испитан је и утицај температуре екстракције. Садржај
амигдалина и кверцетина у добијеним екстрактима одређен је развијеним HPLC
методама. Садржај укупних флавоноида испитан је спектрофотометријском методом,
која се заснива на грађењу комплекса са алуминијум хлоридом.
Амигдалин је изолован из етанолног екстракта семена шљиве након додатка
диетил-етра. Чистоћа овако добијеног амигдалина је 90% и дефинисана је у односу на
расположиви стандард применом HPLC методе. Структурна карактеризација
изолованог амигдалина извршена је применом UV, IC и ESI-MS/MS метода.
У циљу одређивања фармаколошких активности екстраката зеленог чаја и
семена шљиве, изолованог aмигдaлинa, стандарда квeрцeтинa и амигдалина примeњене
су одговарајуће методе за одређивање антиоксидативне (DPPH тест), aнтимикрoбне
(диск дифузиона метода) и aнтипролиферативне активности (МТТ тест).
На основу ових фармаколошких испитивања показано је да стандард кверцетина
и екстракт зеленог чаја имају бољу антиоксидативну активност у односу на стандард
амигдалина и екстракт семена шљиве. Микробиолошким испитивањима утврђено је да
стандард амигдалина и екстракт семена шљиве показују антимикробну активност само
на сојевима Pseudomonas aeruginosa (>23 mm код оба узорка) и Escherichia coli (17-19
mm и 20-22 mm, респективно). Стандард кверцетина и екстракта зеленог чаја показују
додатно дејство и на сој Staphylococcus aureus са зонама инхибиције 20-22 mm и 17-19
mm, респективно.
МТТ тестом утврђено је да су добијене IC50 вредности за изолат и стандард
амигдалина (>379,5 μg cm-3 и 304,65-333,27 μg cm-3, респективно) на испитиваним
ћелијским линијама више у поређењу са екстрактом зеленог чаја и стандардом
кверцетина (47,41-114,39 μg cm-3 и 19,24-44,07 μg cm-3, респективно). Вредности за IC50
су очекиване и у складу са литературним подацима. Цитотоксичност амигдалина може
да се повећава уз додатак ензима β-D-глукозидазе., The plant extracts and compounds isolated from natural sources are commonly used
for prevention of chronic diseases. These bioactive compounds have an increased application
in modern conventional medicine. Despite a great progress in the treatment of malignant
tumors, this disease still takes many lives. Today, a huge number of chemotherapeutics for
tumor treatment can be found in the market. Because of their toxicity most drugs and drug
products can not be applicated in the doses that completely inhibit the cells growth in
organism. Quercetin and amygdalin belong to the most commonly used pharmacological
agents for tumor treatment.
Therefore, the subject of this dissertation is isolation of amygdalin and quercetin from
two plant materials, i.e. green tea leaves and plum seeds. In this study, the effect of extraction
time, solvent nature and solid to liquid ratio was investigated for quercetin, i.e. total
flavonoids from green tea leaves using experimental design and artificial neural network. In
addition to these parameters, the impact of extraction temperature was also studied during
amygdalin extraction from plum seeds. The content of amygdalin, as well as quercetin in the
extracts was determined using the developed HPLC methods. Total flavonoids content was
determined by a spectrophotometric method based on the formation of complex with
aluminium chloride.
Amygdalin was isolated from the ethanolic extract of plum seeds after addition of
diethyl-ether. The obtained amygdalin purity of 90% was defined with regard to the available
amygdalin standard using HPLC method. The structural characterization of isolated
amygdalin was carried using UV, IR and ESI-MS/MS methods.
Adequate methods for determination of antioxidant activity (DPPH assay),
antimicrobial activity (disc diffusion method) and antiproliferative activity (MTT assay) were
used in order to define the pharmacological activities of green tea and plum seeds extracts,
isolated amygdalin, quercetin and amygdalin standards.
Based on all these pharmacological studies, it was shown that quercetin and green tea
extract have better antioxidant activity compared to amygdalin and plum seeds extract.
Amygdalin standard and plum seeds extract have antibacterial activity only on the strain of P.
аeruginosa (>23 mm for both samples) and E. coli (17-19 mm and 20-22 mm, respectively).
Quercetin standard and green tea extract have an additional effect on the strain of S. aureus
with an inhibition zone of 20-22 mm and 17-19 mm, respectively.
IC50 values of isolated amygdalin and its standard (>379.5 μg cm-3 and 304.65-333.27
μg cm-3, respectively) for the investigated cell lines were higher compared to green tea
extract and quercetin standard (47.41-114.39 μg cm-3 and 19.24-44.07 μg cm-3, respectively).
These values were determined using MTT assay and are in accordance with the literature.
The cytotoxicity of amygdalin can be increased by addition of β-D-glucosidase enzyme.",
publisher = "Универзитет у Нишу, Технолошки факултет",
journal = "Универзитет у Нишу",
title = "Оптимизација технолошког поступка изолације амигдалина и кверцетина из биљног материјала и њихова фармаколошка активност, Optimization of the technological procedure for isolation of amygdalin and quercetin from plants and their pharmacological activity",
url = "https://hdl.handle.net/21.15107/rcub_farfar_5113"
}
