Uticaj starenja na fenotipske i funkcijske karakterisrtike dendritiskih ćelija različitih sojeva pacova

Abstract

Dendritske ćelije (DĆ) su profesionalne antigen-prezentujuće ćelije koje činesponu između urođenog i stečenog imuniteta i imaju važnu ulogu u imunskomodgovoru. Pored toga, DĆ imaju ulogu u uspostavljanju i održavanju imunološketolerancije, kao i u patogenezi autoimunskih bolesti. Istraživanja na polju biologijestarenja ćelija imunskog sistem su pokazala da tokom starenja komponente i urođenog istečenog imuniteta podležu promenama. Podaci vezani za uticaj starenja na DĆ nisukonzistentni i uglavnom se odnose na ćelije humanog porekla, ćelije primata i miševa,dok nema podataka o uticaju starenja na DĆ pacova.Cilj ove doktorske disertacije je bio da se ispita uticaj starenja na fenotipske ifunkcijske karakteristike konvencionalnih DĆ (kDĆ) pacova, kao i mogući značajsojnih razlika za nastanak starenjem uslovljenih promena ovih ćelija. Takođe, cilj je bioi da se utvrdi da li starenjem uslovljene promene kDĆ pacova koreliraju sa promenomosetljivosti pacova na indukciju organ-specifičnih autoimunskih bolesti. Ispitivane susveže izolovane kDĆ i stimulisane in vitro lipopolisaharidom (LPS). KonvencionalneDĆ su izolovane iz slezina pacova uzrasta 3 meseca (mladi odrasli pacovi) i 26 meseci(stari pacovi) Albino Oxford (AO) i Dark Agouti (DA) soja, koji pokazuju različitstepen osetljivosti na indukciju organ-specifične autoimunske bolesti posredovaneTh1/Th17 limfocitima, kao što je eksperimentalni autoimunski encefalomijelitis (EAE).Starenje dovodi do veće zastupljenosti ćelija CD4- fenotipa u populaciji svežeizolovanih kDĆ starih AO pacova za razliku od mladih životinja, kod kojih je brojnijaCD4+ subpopulacija, a ne utiče na zastupljenost ovih subpopulacija kod DA pacova,tako da je kod njih u oba uzrasta dominantna CD4- subpopulacija. Osim toga, svežeizolovane kDĆ starih AO pacova pokazuju nezreliji, a starih DA pacova zreliji fenotip,u odnosu na kDĆ mladih pacova odgovarajućeg soja, a što je procenjeno na osnovunivoa ispoljenosti aktivacionih molekula (CD80, CD86 i CD40). U skladu sa fenotipom,endocitozni kapacitet kDĆ starih AO pacova je bio veći, dok je kod kDĆ starih DApacova bio manji. Starenje dovodi do promena u ekspresiji iRNK za proinflamatorne iimunoregulatorne citokine kod pacova oba soja, s tim što su te promene suprotne kada je u pitanju iRNK za IL-6 i IL-1β (starenje smanjuje ekspresiju iRNK za IL-6, apovećava ekspresiju iRNK za IL-1β kod AO), različite (iRNK za IL-10 raste kod DA, ane menja se kod AO pacova) ili slične (ekspresija TNF-a se povećava kod oba sojapacova, a iRNK za TGF-β se značajno ne menja)...

Dendritic cells (DCs) are the professional antigen-presenting cells that form aninterface between innate and adaptive immunity and play an important role in theimmune response. They are also central in the establishment and maintenance ofimmune tolerance, as well as in the pathogenesis of autoimmune diseases. Aging isassociated with the progressive immune system changes, which involve all types ofimmune cells. The data on age-associated DC alterations origin mainly from studies inmice and human, and are largely inconsistent, while there are no data on the influenceof aging on rat DCs.The aim of this thesis was to elucidate the influence of aging on the phenotypicand functional characteristics of conventional DCs (cDCs), and the possible significanceof strain differences in the development of age-related changes. In addition, this thesiswas aimed to investigate a putative correlation between age-related changes in cDCbiology and rat susceptibility to induction of organ-specific autoimmune diseases.Freshly isolated cDCs and cDCs stimulated in vitro with lipopolysaccharide (LPS) wereinvestigated. The cells were isolated from the spleens of 3- (young adult) and 26 monthold(aged) rats of Albino Oxford (AO) and Dark Agouti (DA) strain, which arerelatively resistant (AO) and susceptible (DA) to the induction of Th1/Th17-mediatedorgan-specific autoimmune disease, as it is experimental autoimmune encephalomyelitis(EAE).In AO rats aging increased relative proportion of cells exhibiting CD4-phenotype within population of freshly isolated cDCs, while in young animals CD4+cells represented the predominant subpopulation within cDCs. In DA rats aging did notaffect cDC subset composition, so predominance of CD4- subset within cDCs in rats ofboth ages was found. Aging affected surface phenotype and endocytic capacity offreshly isolated cDCs in a strain-specific manner. Namely, the lower surface density ofactivation markers (CD80, CD86 and CD40) on cDCs from aged AO rats and theirhigher endocytic capacity suggested that they were less mature that cDCs from youngrats. To the contrary, increased surface expression of activation markers on cDCs anddecreased endocytic capacity of these cells in aged DA rats suggested that they weremore mature that corresponding cells from young rats...